代表仪器
服务项目

载体构建、原核细胞蛋白表达、昆虫细胞蛋白表达、亲和纯化、层析系统纯化、Western-blotting(免疫印迹)、Co-IP (免疫共沉淀)、大分子亲和力测定、 复杂蛋白质组分鉴定、蛋白质定量分析、修饰蛋白质组学(磷酸化、糖基化、泛素化、甲基化、乙酰化等)。

联系人:杨老师

电 话:15501017507

服务类型

服务内容

概述

仪器 /技术

联系方式

分子互作

互作因子筛选与发现

Biacore T200分子间相互作用系统利用表面等离子共振原理(SPR)测定分子间实时、无标记的活性分子互作分析,可以检测分子间有无结合;测定分子间的亲和力大小;测定结合和解离的快慢和复合体的稳定性;功能复合体形成的参与者、协同者和组装顺序;分子结合的温度与热力学特征;目标分子活性含量的检测。

Biacore T200分子间相互作用系统

杨老师: 15501017507

亲和力与动力学等互作信息的综合性表征

小分子化合物或抗原 /抗体互作的筛选、鉴定、分级、分型、结构优化以及表位作图

结合关键结构域、关键氨基酸、关键核酸位点、关键碱基的发现与鉴定

蛋白翻译后修饰研究

药物分子活性浓度、有效成分测定

真核细胞培养

蛋白质大量生产

利用昆虫细胞表达系统和哺乳动物表达系统进行同源 /异源蛋白质的表达。

生物安全柜,细胞震荡摇床

细胞学研究

利用真核细胞验证基因编辑效率。

蛋白质异源表达纯化

分子克隆

根据纯化表达和后续实验需求对目的基因进行截断、位点突变并构建于适用于不同表达系统的表达载体上。

细胞培养系统,亲和纯化体系

表达系统筛选

对蛋白表达所使用的表达系统、表达条件等进行筛选。

蛋白质纯化

根据蛋白性质不同,选择亲和纯化、密度梯度离心、盐析不同纯化方式。

色谱分析

亲和层析

ÄKTA avant25制备型液相色谱仪利用样品中物质与层析填料之间的亲和性差异对目标物进行分离。

ÄKTA avant25制备型液相色谱仪

离子交换

ÄKTA avant25制备型液相色谱仪利用样品中物质带电性质的差异对目标物进行分离。

分子筛

ÄKTA avant25制备型液相色谱仪利用样品中物质分子量的差异对目标物进行分离。

质谱分析

蛋白胶点、胶条鉴定

适用于蛋白胶样品的蛋白种类鉴定和蛋白定量测定。

Thermo Scientific Q Exactive Plus质谱仪

蛋白质组全谱鉴定

适用于蛋白溶液样品的蛋白种类鉴定和蛋白定量测定。

DIA定量蛋白质组学

即数据非依赖采集模式下的蛋白质定量方法。将整个全扫描范围分为若干个窗口,并循环地对每个窗口中的所有离子进行选择、碎裂、检测,可以无遗漏地获得样本中所有离子的全部碎片信息,缺失值更少。

磷酸化

检测蛋白磷酸化有无和准确的磷酸化位点。

Label-free定量蛋白组学

不依赖于同位素标记的蛋白质定量技术。该方法只需分析大规模鉴定蛋白质时所产生的质谱数据,比较不同样本中相应肽段的信号强度,就能对相应的蛋白质进行相对定量。

PRM

平行反应监测,通过对特异性肽段或目标肽段(如发生翻译后修饰的肽段)进行选择性检测,从而实现对目标蛋白质 /修饰肽段的靶向相对定量。

应用案例

蛋白质组学平台利用IP-MS为其鉴定出目标蛋白的互作蛋白支撑作科所小麦诱变育种课题组发现一个小麦株型变异突变体,并克隆了调控柱型变化的新基因。以此初步构建了小麦株型调控的新机制,对认识小麦株型形成机制具有重要意义,为培育具有优良株型及更高产量小麦新品种提供理论支撑。


蛋白质组学平台利用高效变性液相色谱仪,为北京农林科学院藜麦蛋白饮料肠消化产物中的多肽进行了分子量分布方面的检测,并进一步分析各组分的生物活性,探究了藜麦蛋白食品来源的生物活性多肽。 蛋白质组学平台协助作科所大豆产量性状解析与设计课题组对大豆PH13的不同单倍型蛋白和GmCOP1b蛋白进行了原核表达纯化,并利用Biacroe2000进行蛋白互作强度分析,为大豆株高在高纬度选择机制解析奠定了重要的理论基础。


蛋白质组学平台为作科所水稻功能基因组学课题组提供真核细胞培养服务,培养了贴壁和悬浮的昆虫细胞系Hi5,Sf9,Sf21等。研究团队利用昆虫细胞进行杆状病毒的包装、细胞传代、细胞侵染、细胞的小量及大量培养等实验操作,可以对水稻等农作物蛋白的多个复杂结构域进行了蛋白质的表达纯化与生化分析,为后续解析蛋白结构、研究其蛋白质功能,寻找活性位点及功能性氨基酸位点等研究奠定了良好基础。

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